aminobenzaldehyde， ammonium acetate，etoh，rt；(c)acrylic chloride，thf，0℃.
12.化合物1的合成：
13.将乙醇钠(90mg，1.3mmol)加入到含有3-羟基-3-甲基-2-丁酮(900mg，8.8 mmol)和丙二腈(1.2g，18.1mmol)的乙醇(10ml)溶液中，常温搅拌1h。之后向反应体系中加入30ml乙醇，50℃回流一小时后冷却至室温。过滤固体沉淀，用少量冷乙醇洗涤，得灰白色晶体(1.89g，90％)。
14.化合物2的合成：
15.称取化合物1(1.99g，150mmol)和对氨基苯甲醛(1.81g，15mmol)，溶解于30ml 无水乙醇中，并向反应体系中加入乙酸铵(0.39g，5mmol)，50℃回流6小时后，抽滤并用冷乙醇洗涤，得深紫红色固体(3.19g，83.9％)。1h nmr(500mhz， chloroform)δ7.58-7.46(m，2h)，7.30(s，1h)，6.76(s，1h)，6.38-6.25(m，2h)， 4.27(s，2h)，1.45(s，6h).13c nmr(125mhz，common nmr solvents)δ165.86(s， 1h)，165.46(s，1h)，149.29(s，2h)，142.95(s，2h)，130.61(s，2h)，124.55(s，2h)， 121.31(s，3h)，115.62(s，2h)，114.34(s，4h)，110.37(s，2h)，93.94(s，1h)，93.72(s， 1h)，60.68(s，1h)，24.58(s，7h).
16.化合物3的合成：
17.称取化合物3(200mg，0.6mmol)溶于适量无水四氢呋喃中，随后在0℃加入丙烯酰氯(70μl)，搅拌反应1小时，随后将所得混合物在室温下进一步搅拌8小时。反应用3ml水淬灭，并用乙酸乙酯(15ml*3)洗涤，无水na2so4干燥。pe∶ea＝5∶ 1柱层析，得橙红色固体粉末(100mg，42.3％)。1h nmr(500mhz，dmso)δ8.80 (s，5h)，7.76(d，j＝7.5hz，11h)，7.56(d，j＝7.4hz，11h)，7.01(d，j＝15.0hz，5h)， 6.24(s，1h)，6.15(d，j＝64.7hz，11h)，5.85(s，5h)，5.03(s，5h)，1.41(s，32h).
13
c nmr(125mhz，common nmr solvents)δ165.90(d，j＝11.6hz，2h)，165.46(s， 1h)，142.95(s，2h)，139.23(s，2h)，130.80(s，2h)，129.10(s，2h)，123.25(s，2h)， 122.83(s，2h)，121.31(s，3h)，121.14(s，4h)，115.62(s，2h)，110.37(s，2h)，93.94(s， 1h)，93.72(s，1h)，60.68(s，1h)，24.58(s，7h).
附图说明
18.图1为本发明的核磁共振氢谱示意图
19.图2为本发明的核磁共振碳谱示意图
20.图3为本发明的选择性测试示意图
21.图4为本发明的干扰性测试示意图
22.化合物3的氢谱：
23.见附图1
24.化合物3的碳谱：
25.见附图2
26.生物活性初步评价
27.选择性测试：
28.见附图3
29.附图说明：该探针(1mm)仅与cys产生响应，对其他底物几乎无响应。
30.干扰性测试：
31.见附图4
32.附图说明：该探针(1mm)不受其他底物的干扰。
33.该小分子荧光探针生物活性的初步评价均表明该探针具有检测半胱氨酸的作用，可以应用于cys过表达的癌细胞的原位检测。
34.以上详细描述了本发明的优选实施方式及生物活性评价，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种等同变换，这些等同变换均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。


技术特征：
1.cys小分子荧光探针的合成路线及方法：
a
reagents and conditions：(a)ch2(cn)2，ch3ch2ona，etoh，50℃；(b)p-aminobenzaldehyde，ammonium acetate，etoh，rt；(c)acrylic chloride，thf，0℃.化合物1的合成：将乙醇钠(90mg，1.3mmol)加入到含有3-羟基-3-甲基-2-丁酮(900mg，8.8mmol)和丙二腈(1.2g，18.1mmol)的乙醇(10ml)溶液中，常温搅拌1h。之后向反应体系中加入30ml乙醇，50℃回流一小时后冷却至室温。过滤固体沉淀，用少量冷乙醇洗涤，得灰白色晶体(1.89g，90％)。化合物2的合成：称取化合物1(1.99g，150mmol)和对氨基苯甲醛(1.81g，15mmol)，溶解于30ml无水乙醇中，并向反应体系中加入乙酸铵(0.39g，5mmol)，50℃回流6小时后，抽滤并用冷乙醇洗涤，得深紫红色固体(3.19g，83.9％)。化合物3的合成：称取化合物3(200mg，0.6mmol)溶于适量无水四氢呋喃中，随后在0℃加入丙烯酰氯(70μl)，搅拌反应1小时，随后将所得混合物在室温下进一步搅拌8小时。反应用3ml水淬灭，并用乙酸乙酯(15ml*3)洗涤，无水na2so4干燥。pe∶ea＝5∶1柱层析，得橙红色固体粉末(100mg，42.3％)。

技术总结
本发明公开了原位检测半胱氨酸荧光探针的设计、合成及活性研究，其合成路线如下：其合成路线如下：其合成路线如下：


技术研发人员：王忠长 袁良超 张卿 雷德维
受保护的技术使用者：南京大学人工智能生物医药技术研究院
技术研发日：2021.10.29
技术公布日：2022/1/28